方法一
1. 將培養24小時左右的枯草芽孢桿菌或其他芽孢桿菌，作涂片、干燥、固定。
2. 滴加3~5滴孔雀綠染液于已固定的涂片上。
3. 用木夾夾住載玻片在火焰上加熱，使染液冒蒸汽但勿沸騰，切忌使染液蒸干，必要時可添加少許染液。加熱時間從染液冒蒸汽時開始計算約4~5分鐘。這一步也可不加熱，改用飽和的孔雀綠水溶液（約7.6%）染10分鐘。
4. 傾去染液，待玻片冷卻后水洗至孔雀綠不再褪色為止。
5. 用番紅水溶液復染1分鐘，水洗。
6. 待干燥后，置油鏡觀察，芽孢呈綠色，菌體呈紅色。
方法二
1. 取二支潔凈的小試管，分別加入0.2 ml 無菌水，再往一管中加入1~2接種環的蠟狀芽孢桿菌的菌苔，另一管中加入1~2接種環的生孢梭菌的菌苔，兩管各自充分混合成濃厚的菌懸液。
2. 在菌懸液中分別加入0.2 ml 苯酚品紅溶液，充分混合后，于沸水浴中加熱3~5分鐘。
3. 用接種環分別取上述混合液2~3環于兩片載玻片上，涂薄，風干后，將載玻片稍傾斜于燒杯上，用95%乙醇沖洗至無紅色液流出。
4. 再用自來水沖洗，濾紙吸干。
5. 取1~2接種環黑色素溶液于涂片處，立即展開涂薄，自然干燥后，油鏡觀察，在淡紫灰色背景的襯托下，菌體為白色，菌體內的芽孢為紅色。
