選擇來自藍(lán)藻桿菌（ShCAST）中的CAST系統(tǒng)進(jìn)行高通量細(xì)菌基因組工程，CAST系統(tǒng)由tn7樣轉(zhuǎn)座酶亞基和亞型V-K CRISPR-Cas蛋白Cas12k組成。合成了天然的TnsB-TnsC-TniQ操縱子和Cas12k基因。通過Gibson組裝將兩個(gè)片段組裝成pCasPA質(zhì)粒的主干，得到pCASTPA質(zhì)粒。通過證明ShCAST應(yīng)用于銅綠假單胞菌和肺炎克雷伯菌位點(diǎn)特異性轉(zhuǎn)位的可行性和有效性，突出了其廣泛的宿主范圍活性。通過包括兩個(gè)選擇系統(tǒng)（sacB和慶大霉素），高效地富集了所需的轉(zhuǎn)座子突變體，使構(gòu)建高通量轉(zhuǎn)座子突變體庫成為可能。由于其廣泛的宿主范圍活性，該方法可以廣泛應(yīng)用于不同的微生物物種，以構(gòu)建位點(diǎn)特異性基因組規(guī)模或聚焦文庫，能夠快速分析微生物菌株的基因功能和工程。

參考文獻(xiàn)：Chen W, Ren ZH, Tang N, Chai G, Zhang H, Zhang Y, Ma J, Wu Z, Shen X, Huang X, Luo GZ, Ji Q. Targeted genetic screening in bacteria with a Cas12k-guided transposase. Cell Rep. 2021 Aug 31;36(9):109635.