構建了PGAP-Cpf1質粒，用Cpf1/ S和Cpf1/A引物從質粒中擴增出密碼子優化的FnCpf1片段，設計FnCpf1并與核定位序列（NLS）融合，使真核細胞進入細胞核。利用PGAPHKA-S/PGAPHKA-A引物從PGAPHKA中擴增出含有GAP啟動子、卡那霉素抗性表達盒和大腸桿菌復制序列的來源（片段2）。然后使用Gibson組裝方法組合兩個片段。PTEF-Cpf1質粒的構建方法與上述方法相似。

參考文獻：Zhang X, Gu S, Zheng X, Peng S, Li Y, Lin Y, Liang S. A Novel and Efficient Genome Editing Tool Assisted by CRISPR-Cas12a/Cpf1 for Pichia pastoris. ACS Synth Biol. 2021 Nov 19;10(11):2927-2937.