利用引物從大腸桿菌MG1655基因組中擴增出aldH基因，然后克隆到pGEM-T easy中，將dhaB-gdrA 和 gdrB片段克隆到pCDFDuet-1的相同酶切位點，生成pCDFDuet-1/dhaB-gdrAB。此外，將在pGEM-T easy上攜帶aldH的BamHI-HindIII片段克隆到pTrc99A表達載體。擴增出四環素抗性基因和zwf、tpiA和yqhD上游和下游的同源區域，構建缺失載體，然后用P1噬菌體轉導，獲得敲除菌株。最后，將質粒pTrc99A/aldH和pCDFDuet-1/dhaB-gdrAB導入MG1655（DE3）和敲除菌株中。

參考文獻：Tokuyama, K., Ohno, S., Yoshikawa, K. et al. Increased 3-hydroxypropionic acid production from glycerol, by modification of central metabolism in Escherichia coli . Microb Cell Fact 13, 64 (2014).