首先構(gòu)建一個衍生質(zhì)粒pLP10。pLP10由一個包含R6K復(fù)制起源、一個RP4轉(zhuǎn)移起源和一個來自pSW23T的氯霉素抗性基因（cat）的片段，以及一個包含一個致命的反選擇基因ccdB和一個來自pSW25T-ccdB的PTAC啟動子系統(tǒng)的片段組成。將pLP10中的ccdB基因替換為vmi480，生成質(zhì)粒pLP11，然后將pLP11中的PTAC啟動子系統(tǒng)替換為PBAD啟動子系統(tǒng)，生成新的質(zhì)粒pLP12。通過AhdI消化后的pLP11和pLP12擴增得到自殺性t載體pLP11-T和pLP12-T，導(dǎo)致每個t載體兩端都有單堿基3-T懸垂。
參考文獻：Luo P, He X, Liu Q, Hu C (2015) Developing Universal Genetic Tools for Rapid and Efficient Deletion Mutation in Vibrio Species Based on Suicide T-Vectors Carrying a Novel Counterselectable Marker, vmi480. PLOS ONE 10(12)
