提出了一種將原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法和電穿孔法相結(jié)合的轉(zhuǎn)化方法,即地衣芽孢桿菌原生質(zhì)體電轉(zhuǎn)化法。該方法一方面利用了原生質(zhì)體脫壁的特性,有效減少了DNA的穿透阻力;另一方面利用瞬時電擊穿孔的機制增加了質(zhì)粒DNA進(jìn)入原生質(zhì)體細(xì)胞的數(shù)量,由此提高地衣芽孢桿菌的轉(zhuǎn)化效率。首先通過制備原生質(zhì)體的方法去掉阻礙外源DNA進(jìn)入細(xì)胞的細(xì)胞壁組分,再利用瞬時電壓沖擊細(xì)胞膜產(chǎn)生短暫穿孔,使DNA無需借助凝聚作用而是在電場作用下高效的進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。這樣做一方面減少了DNA的穿膜阻力,另一方面增加了原生質(zhì)體細(xì)胞接收外源DNA的量,因此提高了地衣芽孢桿菌的轉(zhuǎn)化效率。
文獻(xiàn)參考:溫賽,楊建國. 地衣芽孢桿菌原生質(zhì)體電轉(zhuǎn)化方法的研究[J]. 中國生物工程雜志, 2015, 35(7): 76-82.