技術原理：

以大腸桿菌MG1655(DE3)為底盤，分兩步完成羥基四氫嘧啶工程菌改造。

第一步采用基因組多拷貝整合策略，在菌株多個假基因位點插入P43驅動的ectABC表達盒，構建七拷貝無質粒菌株ECT04，搖瓶四氫嘧啶產量達6.03 g/L，傳代穩定性好，規避質粒丟失問題。

第二步引入需鹽色桿菌來源ectD基因，對比高、中、低拷貝載體，確定低拷貝pACYCDuet-1載體更適配EctD表達；同時篩選T7、Ptrc等多種啟動子，T7誘導型啟動子表達效果最優。

后續開展輔因子發酵調控改造：EctD為Fe²+、α-酮戊二酸依賴型雙加氧酶，優化兩種底物添加濃度；7L補料罐采用分段溶氧調控，前期20%DO促菌體生長，24h后提升至40%強化羥基化反應。

最終改造菌株7L發酵罐羥基四氫嘧啶產量8.58 g/L，生產強度0.24 g/(L·h)，為穩定低成本發酵提供改造方案。

文獻來源：

童海瑞,張皓,黃巍巍,張琦,邱益彬,李莎. 產羥基四氫嘧啶大腸桿菌工程菌株的構建與發酵優化[J]. 生物工程學報, 2025, 41(9): 3448-3458

原文鏈接：https://cjb.ijournals.cn/cjbcn/article/abstract/07250262