技術原理：

以食品級釀酒酵母CEN.PK2-1C為底盤，采用雙重代謝改造策略構建半乳糖醇合成工程菌。

第一步外源途徑強化：篩選8種真菌/酵母木糖還原酶基因，無縫克隆至TEF1強啟動型pRS313載體，篩選出黑曲霉來源AnXR，該酶催化半乳糖轉化效率最優(yōu)，在大腸桿菌中完成表達純化，酶學特性適配全細胞催化。

第二步阻斷內源競爭通路：利用同源重組敲除Leloir途徑關鍵GAL1基因，插入neo抗性篩選盒，消除酵母對半乳糖的內源分解消耗，大幅減少底物分流。

改造后菌株SC-5兼具還原能力與底物留存優(yōu)勢，再通過菌體密度、底物濃度全細胞催化條件優(yōu)化，半乳糖醇產量達12.10 g/L。

該改造體系通用性強，AnXR底物譜廣，可催化木糖、阿拉伯糖等多種單糖生成對應功能性糖醇，為綠色糖醇生物轉化提供成熟底盤改造方案。

文獻來源：

鄧連妹,李嬌,門燕,孫媛霞,賈士儒,朱玥明. 釀酒酵母轉化半乳糖醇的工程菌株構建及優(yōu)化[J]. 生物工程學報, 2024, 40(6): 1909-1923

原文鏈接：https://cjb.ijournals.cn/cjbcn/article/abstract/gc24061909