將密碼子優(yōu)化的gdh基因和天然谷氨酸脫氫酶基因（cgdh）置于P43啟動(dòng)子的下游，使用EcoRI和XbaI的限制性酶切位點(diǎn)連接到pHT315質(zhì)粒中，產(chǎn)生質(zhì)粒pHT315-gdh和pHT315-cgdh。將xylR基因置于Pgrac啟動(dòng)子的下游，連接到pHT01的BamHI位點(diǎn)，產(chǎn)生質(zhì)粒pHT01-xylR。Pxyl啟動(dòng)子（來自pWH1520的木糖誘導(dǎo)型啟動(dòng)子）被置于bgaB基因的上游，并連接到pCB的KpnI和SalI位點(diǎn)，產(chǎn)生質(zhì)粒pCB-Pxyl。為了控制odhAB基因表達(dá)，通過無標(biāo)記基因操作方法將Pxyl前體或PO1啟動(dòng)子單獨(dú)插入NK-1菌株odhA基因的上游。為了避免其天然PodhAB啟動(dòng)子的泄漏表達(dá)，將枯草芽孢桿菌spoVG基因轉(zhuǎn)錄終止子整合到PodhAB前體下游和新插入的啟動(dòng)子（Pxyl或PO1）上游的染色體中。

參考文獻(xiàn)：Feng J, Quan Y, Gu Y, Liu F, Huang X, Shen H, Dang Y, Cao M, Gao W, Lu X, Wang Y, Song C, Wang S. Enhancing poly-γ-glutamic acid production in Bacillus amyloliquefaciens by introducing the glutamate synthesis features from Corynebacterium glutamicum. Microb Cell Fact. 2017 May 22;16(1):88.