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產品名稱

2V6.11

商品貨號

MZ-0328

中文名稱

人胚腎細胞

組織來源

腎; 用腺病毒5(Ad5)DNA轉化; 用腺病毒前區4質粒DNA轉染。

培養基

MCM-0314：2V6.11細胞專用培養基

形態特征

上皮細胞樣

細胞污染

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

培養條件

MEM培養基(GIBCO,貨號41500034，添加NaHCO3 1.5g/L，Sodium Pyruvate 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。

生長特性

貼壁生長

凍存條件

基礎培養基+8%DMSO+20%FBS　

傳代方法

消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。

特征特性

這株細胞是2001年從人胚腎細胞株293衍化而來。293細胞用攜帶Zeocin-抗性標記的質粒pVgRXR轉染得到293pVgRXR細胞。隨后,用包含編碼E424K的Ad5E4ORF6基因的質粒pEKORF6轉染。pEKORF6從包含潮霉素抗性基因的質粒pIndHydro衍生而來。載體包含SV40病毒序列。2V6.11細胞株最初從含潮霉素的培養液中用克隆環分離單克隆得到。2V6.11細胞誘導表達的人腺病毒E434KDa蛋白可通過免疫印跡法檢測。這株細胞可以用作研究腺病毒E4癌基因的工具。

細胞凍存步驟

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

復蘇細胞步驟

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

細胞傳代步驟

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

MZ-0425：HET-1A

MZ-0423：HCT116-GFP

MZ-0421：HCC1588

MZ-0422：GIST-T1

MZ-0419：DMS 454

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