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小鼠腦微血管內皮細胞株

T25

腦微血管；內皮細胞；BALB/c

上皮樣

細胞用表達多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆轉錄病毒轉染進行轉化。 觀察到血管性血友病因子的表達及對熒光標記的低密度脂蛋白（LDL）的攝入確認其內皮細胞特性。 bEnd.3 cells細胞可用細胞因子和脂多糖(LPS)誘導淋巴細胞的Peyer's結高內皮細胞受體， 粘膜血管定居因子(MAdCAM-1) 及內皮細胞選擇素的表達。 腫瘤壞死因子 a (TNF alpha), 白介素 1 (IL-1)或 LPS的誘導作用是濃度及時間依賴的。 代數較早的bEnd.3細胞未受刺激時在表面表達MAdCAM-1，但過了30代后就不表達了。 細胞粘附分子 1 (ICAM-1)持續表達，并在LPS, IL-1 and TNF a處理后升高。 30代前血管細胞粘附分子 1 (VCAM-1)持續表達，但30代后不表達。 bEnd.3細胞中腫瘤壞死因子a (TNF alpha)可以誘導P-選擇素的表達，30代后更強。

DMEM+10%FBS+丙酮酸

1：2傳代

貼壁生長

無血清細胞凍存液

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。