產(chǎn)品說(shuō)明
支原體是最小和自我復(fù)制的原核生物，是原代和連續(xù)細(xì)胞系培養(yǎng)物的常見(jiàn)污染物。已經(jīng)表明，微囊藻污染影響細(xì)胞生長(zhǎng)，形態(tài)和代謝。由于其尺寸小和柔韌性，支原體可以通過(guò)0.2μm的常用過(guò)濾器。此外，與細(xì)菌和真菌不同，微囊菌污染對(duì)常用抗生素具有抗性，并且不容易在視覺(jué)上被發(fā)現(xiàn)。這些缺點(diǎn)強(qiáng)調(diào)需要定期篩查以控制支原體污染。常規(guī)篩選方法包括微生物培養(yǎng)，熒光DNA染色和生化檢測(cè)方法。然而，支原體培養(yǎng)僅限于專門(mén)的實(shí)驗(yàn)室，需要2-4周。由于存在破碎的細(xì)胞核，DNA熒光染色的結(jié)果難以解釋。各種生化檢測(cè)耗時(shí)且通常缺乏靈敏度。最近，基于聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）的方法已被開(kāi)發(fā)為快速方便地檢測(cè)低水平支原體感染，由于其極端的靈敏度和特異性，其提供了優(yōu)于常規(guī)方法的巨大優(yōu)勢(shì)。 支原體16S rRNA序列的計(jì)算機(jī)比對(duì)研究揭示了高度保守序列的存在。根據(jù)這些序列設(shè)計(jì)的引物允許支原體DNA片段的特異性擴(kuò)增，從而高度靈敏地檢測(cè)支原體。ScienCell? 支原體PCR檢測(cè)試劑盒是基于16S rRNA的PCR測(cè)定，包括2X反應(yīng)緩沖液，引物組，以及內(nèi)部擴(kuò)增對(duì)照（IAC）和陽(yáng)性樣品對(duì)照。我們選擇的屬特異性引物組識(shí)別出占污染98%的五種典型污染支原體物種（即M.hyorhinis，M。arginini，M。orale，M。fermentans和A.laidlawi），以及Ureaplasma，Spiroplasma和Acholeplasma屬的成員，它們占污染的剩余2%。該試劑盒不擴(kuò)增真核和細(xì)菌DNA。IAC被設(shè)計(jì)為通過(guò)同一組引物與目標(biāo)支原體序列同時(shí)共擴(kuò)增。得到的對(duì)照條帶通過(guò)分子量的差異與靶條帶區(qū)分開(kāi)，表明DNA擴(kuò)增的發(fā)生。因此，可以鑒定由于在一些細(xì)胞培養(yǎng)物中存在PCR抑制劑而導(dǎo)致的假陰性結(jié)果。我們的試劑盒還提供陽(yáng)性樣品對(duì)照，它是發(fā)酵乳桿菌的非感染性基因組DNA（gDNA）。另一方面，無(wú)模板（即無(wú)DNA的DI H 2 O）陰性樣品對(duì)照可以幫助確定由于殘留污染是否存在假陽(yáng)性結(jié)果。每個(gè)實(shí)驗(yàn)應(yīng)包括陽(yáng)性和陰性樣品對(duì)照，以及IAC。
