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人胚腎細胞-綠色熒光蛋白標記

人胚胎腎

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

90% DMEM+10% FBS+PS

貼壁

無血清凍存液，液氮儲存

1:2至1:3，每周 2-3次

特別注意 該細胞貼壁不牢，運輸過程中細胞會有脫落，如細胞脫落，請離心收集，消化后重新鋪瓶 背景介紹 Luciferase HEK-293細胞穩定表達螢光蛋白。該細胞株性狀穩定，培養時不需要添加抗生素維持。可用作螢光蛋白活性檢測中的陽性對照，也可用于活體動物成像實驗。該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶GFP基因。 HEK-293細胞是剪切過的人腺病毒5(Ad5)轉染的人胚腎細胞形成的永生化細胞，HEK-293細胞包含并表達轉染的Ad5基因。早期報道中指出，293 HEK-293細胞基因組中含有腺病毒5(Ad5)基因組的左側端和右側端的DNA，但是現在明確了只存在其左側端的DNA。經過對Ad5的插入點的克隆測序發現，Ad5的1-4344位線性核苷酸整合入293 [HEK-293]細胞19號染色體(19q13.2)。293 [HEK-293]細胞為人類腺病毒載體擴增的宿主，可表達異常的玻連蛋白的細胞表面受體，由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。 puro藥篩濃度 HEK293-eGFP細胞puro藥篩濃度為1. 0ug/ml，培養過程中可不用再添加puro，如若擔心抗性隨著傳代時間降低，可定期用0.5ug/ml濃度puro維持

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。