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產品名稱

ES-E14TG2a細胞

商品貨號

MZ-7052

中文名稱

ES-E14TG2a 小鼠胚胎干細胞

組織來源

小鼠胚胎

培養基

形態特征

球形克隆細胞樣

細胞污染

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

培養條件

ES-E14TG2a小鼠胚胎干細胞專用培養基

生長特性

貼壁生長

凍存條件

無血清凍存液，液氮儲存

傳代方法

首次傳代建議1：2傳代，該細胞傳代在10代以內

特征特性

ES-E14TG2a細胞缺乏HGPRT（HPRT），并且對0.06 mM的6-硫鳥嘌呤有抗性。當在飼養層（胚胎成纖維細胞或STO細胞）上培養時，細胞保持未分化狀態。在沒有飼養層的情況下，細胞自發分化并形成胚胎結構。當注入胚泡中時，細胞可以進入生殖系。在常規的分子基因修飾技術之后，它們可用于重構小鼠胚胎。該細胞株需使用昆明白 MEF 作為飼養層細胞。

細胞凍存步驟

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

復蘇細胞步驟

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

細胞傳代步驟

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

MZ-0425：HET-1A

MZ-0423：HCT116-GFP

MZ-0421：HCC1588

MZ-0422：GIST-T1

MZ-0419：DMS 454

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