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人原代子宮微血管內皮細胞

手術切除的子宮組織

鋪路石，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

子宮微血管內皮細胞專用培養(yǎng)

Freeze medium: FBS/NBS, 92%;DMSO, 8%（for reference）Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

子宮是女性特有器官，其微循環(huán)結構有別于其它臟器。通常狀態(tài)下，子宮微血管排列呈樹枝狀，管徑較細，微血管之間的間距較大，子宮毛細血管與靜脈之間并不是直接連接，其間有一個竇狀隙結構，竇狀隙壁上得纖維網眼，像海綿一樣，血液經過竇狀隙時血漿向整個組織內滲透進行物質交換后再回到靜脈中。 微血管作為分布最廣的血管。它是連接微動脈和微靜脈的血管。它們分支并互相吻合成網。管壁薄，通透性強。其功能是利于血液與組織之間進行物質交換。 微血管管壁主要由一層內皮細胞和基膜組成。細的毛細血管橫切面由一個內皮細胞圍成。