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產(chǎn)品名稱

HCT116-GFP

商品貨號

MZ-0423

中文名稱

結腸癌細胞(GFP標記)

培養(yǎng)基

組織來源

人結腸

形態(tài)特征

上皮樣細胞

細胞污染

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

培養(yǎng)條件

氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

生長特性

貼壁生長

凍存條件

無血清凍存液，液氮儲存

傳代方法

首次傳代建議1：2傳代 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

特征特性

Luciferase HCT 116細胞穩(wěn)定表達綠色熒光蛋白標記。該細胞株性狀穩(wěn)定，培養(yǎng)時不需要添加抗生素維持。可用作綠色熒光蛋白標記活性檢測中的陽性對照，也可用于活體動物成像實驗。該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶CGFP基因。 HCT 116細胞是由M·Brattain等人于1979年從患結腸癌的男性病人中分離的三株惡性細胞中的一株。HCT 116細胞在半固體瓊脂糖培養(yǎng)基中形成克隆；HCT 116細胞在無胸腺裸鼠有致瘤性，形成腫瘤結節(jié)。HCT116-CGFP細胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml，培養(yǎng)過程中建議使用0.5ug/ml濃度puro維持

細胞凍存步驟

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

復蘇細胞步驟

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

細胞傳代步驟

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

MZ-0425：HET-1A

MZ-0421：HCC1588

MZ-0422：GIST-T1

MZ-0419：DMS 454

MZ-0418：DMS-79

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