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永生化大鼠肝竇內皮細胞

永生化大鼠肝竇內皮細胞采用體外灌注和密度梯度離心法和基因轉染制備而來

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

永生化大鼠肝竇內皮細胞完全培養基

肝血竇是相鄰肝板之間的腔隙，是一種特殊的毛細血管。肝血竇的竇壁由肝細胞的細胞膜構成，故肝血竇的通透性較大，有利于肝細胞與血流之間進行物質交換。在電鏡下觀察，肝血竇內皮細胞與肝細胞之間有一狹窄間隙，稱竇周隙(Disse腔)。肝竇內皮細胞是肝臟非實質細胞的主要細胞群，由肝竇內皮細胞構成的肝竇壁是全身毛細血管壁中缺乏基膜的毛細血管窗孔，足肝竇內皮細胞最具特征性的結構。肝竇內皮細胞在調節肝竇血流與周圍組織的物質交換中起有效的中樞性的作用，因此肝竇內皮細胞對于維持正常的肝功能起十分重要的作用。同時肝竇內皮細胞在肝臟的生理病理過程中發揮著諸多的重要功能

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。