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關節炎；關節組織；人

5×105cells/T25培養瓶

貼壁

成纖維細胞樣

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

滑膜是關節囊的內層，淡紅色，平滑閃光，薄而柔潤，由疏松結締組織組成。關節腔內的所有結構，除關節軟骨、半月軟骨板以外,即便是通過關節腔的肌腱、韌帶等均全部為滑膜所包裹。 滑膜分泌滑液，在關節活動中起重要作用。正常滑膜分為兩層，即薄的細胞層(內腔層)和血管層(內膜下層)，是血管豐富的關節囊內膜，貼附于非關節面部分，覆蓋于關節囊內的骨面上，不在軟骨面上，此部分稱為邊緣區或“裸區”。滑膜呈粉紅色，光滑發亮、濕而潤滑，有時可見絨毛，內含膠原性纖維。 滑膜細胞有A、B兩型。巨噬細胞樣A型細胞，表面有絲狀偽足、漿膜內陷、囊泡、線粒體、溶酶體、胞漿纖維和高爾基體，具有吞噬功能；B型成纖維 樣滑膜細胞(FLS) ，有高濃度的內質網結構，是介導 RA 關節破壞的主要細胞。

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。