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正常肝組織；人

5×105cells/T25培養瓶

貼壁

內皮細胞樣

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

內皮細胞或血管內皮是一薄層的專門上皮細胞，由一層扁平細胞所組成，呈多邊形，細胞的邊緣呈鋸齒狀，相互嵌合。它形成血管的內壁，是血管管腔內血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口。內皮細胞是沿著整個循環系統，由心臟直至最小的微血管。 心室內表面的內皮細胞稱為心內膜。微血管及淋巴微管是由單一層的內皮細胞所組成。 內皮組織是一種特別的上皮組織，而上皮組織是動物的四種生物組織之一。血管內皮細胞（EC）位于血漿與血管組織之間，它不僅能完成血漿和組織液的代謝交換，并且能合成和分泌多種生物活性物質，以保證血管正常的收縮和舒張，起到維持血管張力，調節血壓以及凝血與抗凝平衡等特殊功能，進而保持血液的正常流動和血管的長期通暢?？鼓牧媳砻鎯绕ぜ毎?，可以減少血栓的形成和血小板激活。

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。