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中國成年病人手術后的肝癌組織

5×105cells/T25培養瓶

貼壁

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

1.彌漫型表現為均勻散在微小結節，分布于整個肝臟，結節大小較一致，一般不超過肝小 葉的大小，幾乎總是和肝硬化同時存在，肝臟正常或略小，與肝硬化不易區別，是較少見的 一型，約占原發性肝癌的5%，發展快，預后差。 2.塊狀型可分為單純塊狀型、融合塊狀型及多塊狀型。單純塊狀型，癌腫為單個腫塊，邊 界清楚或不規則，常有完整或不完整包膜，有的可無包膜，腫塊邊緣常可見小的衛星癌結節。 融合塊狀型，可見以癌塊為中心向周圍呈浸潤性生長，并與鄰近之大小癌結節。多塊狀型為 兩個以上的單塊或融合塊，本型約占原發性肝癌的30%，因多伴有肝硬化，預后較好。 3.結節型腫瘤為多數大小不等的結節，突出在肝臟表現，遍及全肝，多并發肝硬化。腫瘤 結節呈灰白色或灰黃色，也可呈棕紅色。本型可分為單結節型、融合結節型及多結節型。本 型約占全部肝癌的2/3，預后較差。 4.小癌型指癌腫直徑在5cm 以下（有人認為在3cm 以下），且為單個存在，一般有完整的 包膜，惡性程度低，基本上是早期肝癌。手術切除率高，預后好。

肝細胞癌 膽管細胞癌 混合型肝癌 纖維板層型肝癌

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。