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中國成年病人手術后的結腸癌組織。

5×105cells/T25培養(yǎng)瓶

貼壁

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

1.腫塊型(菜花型、軟癌)結腸癌：腫瘤向腸腔內生長、瘤體較大，呈半球狀或球狀隆起，易 潰爛出血并繼發(fā)感染、壞死。該型多數(shù)分化較高，侵潤性小，生長較慢，好發(fā)于右半結腸。 2.侵潤型(縮窄型、硬癌)結腸癌：腫瘤環(huán)繞腸壁侵潤，有顯著的纖維組織反應，沿粘膜下生 長，質地較硬，易引起腸腔狹窄和梗阻。該型細胞分化程度較低，惡性程度高，出現(xiàn)轉移早。 好發(fā)右半結腸以遠的大腸。 3.潰瘍型結腸癌：腫瘤向腸壁深層生長并向腸壁外侵潤，早期即可出現(xiàn)潰瘍，邊緣隆起，底 部深陷，易發(fā)生出血、感染，并易穿透腸壁。細胞分化程度低，轉移早。是結腸癌中最常見 的類型，好發(fā)于左半結腸、直腸。

1.腺癌：大多數(shù)結腸癌是腺癌，約占四分之三，腺癌細胞可辨認，排列成腺管狀或腺泡狀， 按其分化程度可分為三級，Ⅲ級分化最差，細胞排列為片狀或索條狀。 2.粘液癌：癌細胞分泌粘液，在細胞內可將細胞核擠到一邊(狀似戒指，有稱作印戒細胞癌)， 在細胞外可見間質內有粘液以及纖維組織反應，癌細胞在片狀粘液中似小島狀。分化低，予 后較腺癌差。 3.未分化癌：癌細胞小，形狀與排列不規(guī)則，易侵入小血管及淋巴管，侵潤明顯。分化很低， 愈后最差。

目前較為統(tǒng)一的結腸癌分期是Dukes 分期 Ⅰ期(Dukes A 期)：結腸癌局限于腸壁內 A0 期：結腸癌局限于粘膜 A1 期：結腸癌局限于粘膜下層 A2 期：結腸癌侵及腸壁肌層未穿透漿膜 Ⅱ期(Dukes B 期)：結腸癌侵潤至腸壁外 Ⅲ期(Dukes C 期)：伴有淋巴腺轉移 C1 期：近處淋巴轉移(腸旁) C2 期：遠處淋巴轉移(系膜) Ⅳ期(Dukes D 期)：結腸癌已有遠處轉移 www

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。