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中國成年病人手術(shù)后的直腸癌組織

5×105cells/T25培養(yǎng)瓶

貼壁

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

1、直腸癌腫塊型：又稱菜花型癌。癌腫向腸腔內(nèi)突出，浸潤腸壁少，癌腫增大時表面可產(chǎn) 生潰瘍，預(yù)后較差。 2、直腸癌潰瘍型：多見，占50%，向腸壁深層生長，并向四周浸潤，易出血，分化程度低， 較早轉(zhuǎn)移。 3、直腸癌狹窄型：少見，又稱浸潤性。癌腫沿腸壁蔓延浸潤，易引起腸壁狹窄，轉(zhuǎn)移早且 預(yù)后差。

1、管狀腺癌：癌組織細胞呈管狀樣結(jié)構(gòu)。 根據(jù)分化程度，可分化為三級： （1）高分化腺 （2）中分化腺癌 （3）低分化腺癌 2、粘液腺癌：癌細胞中出現(xiàn)大量粘液。粘液成分占全部癌組織細胞60％以上，才能診斷為 粘液腺癌。60%一下則不屬于粘液腺癌，以粘液的多少來作為診斷標準，粘液腺癌大約占直 腸腺癌的20%左右。 3、乳狀腺癌：癌組織細胞呈粗細大小不等的乳頭狀結(jié)構(gòu)，乳頭中央為中心索。 乳狀腺癌根據(jù)生長方式可分兩種： （1）腺癌組織細胞向粘膜表面生長呈絨毛狀腺瘤。 （2）腫瘤向深部腺腔內(nèi)蔓延侵潤呈囊狀結(jié)構(gòu)呈乳頭狀增生。 4、未分化癌：癌細胞比較小，呈團塊狀，形狀與排列不整齊，容易侵入細小血管及淋巴管 道中，侵潤比較明顯，分化程度比較低。

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。