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中國成年病人手術后的膀胱癌組織。

5×105cells/T25培養瓶

貼壁

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

（1）移行細胞癌 （2）鱗狀細胞癌 （3）腺癌 （4）有些為混合性。其中以移行細胞癌為最常見，腺癌很少見。

TNM 分期Tａ 非浸潤性乳頭狀癌Tiｓ 原位癌T1 腫瘤侵及上皮下結締組織T2 腫瘤侵及淺 肌層；T3 腫瘤侵及深肌層或膀胱周圍脂肪:T3a 侵及深肌層；T3b 侵及膀胱周圍脂肪；T4 侵 及鄰近組織:T4a 侵犯前列腺，子宮；T4b 侵犯盆壁，腹壁陰道N1 單一，≤2cm 淋巴結轉 移N2 >2～5cm，或都是≤5cm 多發淋巴結轉移N3 有>5cm 淋巴結轉移Mo 無遠處轉移M1 有遠處轉移Oa 期Ta No Mo()i。期Tis No MoI 期Tl No MoⅡ期T2 No MoT3a No MoⅢ期 T3a-b No MoⅣ期T4b No Mo 任何T N1-3 Mo 任何T 任何N MlJewett-Marshall 分期O 期原 位癌O 期非浸潤乳頭狀瘤A 期粘膜下浸潤Bl 期侵犯淺肌層B2 期．侵犯深肌層C 期侵 犯膀胱周圍脂肪D1 期局部淋巴結轉移D2 期鄰近局部淋巴結轉移遠處轉移 www.

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。