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中國成年病人手術后的胰腺癌組織

5×105cells/T25培養瓶

貼壁

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

胰腺癌分期標準很多，各有其代表性，亦能反應其特點，關鍵的問題還是有無淋巴結轉移。

1、導管腺癌:導管腺癌占胰腺癌的80％～90％，主要由分化不同程度的導管樣結構的腺體構 成，伴有豐富的纖維間質。有腺腔樣分化的區域，可有少量粘液，腫瘤的間質含有豐富的和 Ⅳ型膠原。 2、特殊類型的導管起源的癌: （1）多形性癌：亦稱巨細胞癌。 （2）腺鱗癌：偶見于胰腺，可能為胰管上皮鱗化惡變的結果。腫瘤由腺癌和鱗癌成分。純 粹的鱗癌在胰腺相當罕見。 （3）粘液癌：切面可呈膠凍狀，極相似于結腸的膠樣癌。 （4）粘液表皮樣癌和印戒細胞癌：在胰腺中偶可見到。 （5）纖毛細胞癌：形態與一般導管癌相同，其特點是有些細胞有纖毛。 3、腺泡細胞癌:僅占1％，腫瘤細胞呈多角形、圓形或矮柱形。核圓、常位于基底部。瘤細 胞排成腺泡狀或條索狀，胞漿強嗜酸性顆粒狀。 4、小腺體癌：為少見類型的胰腺癌，胰頭部較為多見。 5、大嗜酸性顆粒細胞性癌：此型腫瘤罕見，其腫瘤細胞具有豐富的嗜酸性顆粒性胞漿，核 圓形或卵圓形，排列成小巢狀。其間有纖維間隔分隔。 6、小細胞癌：胰腺小細胞癌形態上與肺小細胞癌相似，約占胰腺癌的1％～3％。由一致的 小圓細胞或燕麥樣細胞構成，胞漿很少，核分裂很多，常有出血壞死，NSE 免疫組化染色 陽性，此型預后很差。多在2 月內死亡。其起源尚不清楚

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。