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中國成年病人手術后的子宮癌組織。

5×105cells/T25培養瓶

貼壁

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

1975 年世界衛生組織提出單純性子宮內膜腺癌的組織學分級法： Ⅰ級：為高度分化癌，常局限于子宮內膜，偶見單層或復層乳頭樣上皮，排列不整齊，可呈 塊狀，間質減少。 Ⅱ級：為中度分化癌，腺體輪廓欠清晰，一部分呈癌塊狀；細胞極向消失，核分裂常見。 Ⅲ級：為低分化癌，腺體結構消失，以癌塊為主，有時須經結締組織染色方可與肉瘤區別； 成堆的癌細胞侵蝕間質并深入肌層。 Ⅳ級：為顯著未分化癌，癌細胞幼稚，缺乏分化或不 典型分化，有絲分裂象明顯。 組織學分級有顯著預后意義，分級越高，預后越差。 子宮癌-癌癥分期 第零期：指癌細胞仍局限在子宮頸上皮區內。 第一期：癌細胞只局限在子宮頸部位。而從第一期開始，癌癥已經開始有了侵犯的現象。 第二期：癌細胞已經侵犯到陰道的上三分之二或是子宮旁的結締組織。 第三期：癌細胞已經侵犯到陰道的下三分之一，或是已經侵犯到了骨盆腔。 第四期：癌細胞已經突破生殖器官部份，或是已經超過了骨盆腔的范圍而直接侵犯了直腸或 膀胱，甚至發生了遠程的轉移。 侵潤性子宮內膜癌可分為局限型和彌漫型兩種。 1、局限型腺癌：大多數宮體癌，腫瘤開始為宮底或宮角部的無蒂或有蒂的腫物，其質軟、 脆，表面可能發生出血、壞死、潰瘍或感染。此型病灶雖小，但侵潤肌層遠比向周圍擴散為 快。 2、彌漫型腺癌：腫瘤沿內膜層蔓延，可侵犯內膜的大部或全部，常呈不規則息肉狀，浸潤 肌層較晚；子宮較大且較早表現。病變可沿子宮向下蔓延侵及子宮頸部管。

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。