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中國成年病人手術后的髓母細胞瘤組織。

5×105cells/T25培養瓶

貼壁

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

髓母細胞瘤柔軟易碎，邊界略可辯認。切面呈灰紅色，較大的腫瘤中央常有壞死。腫瘤 絕大多數位于小腦蚓部。突入第四腦室并常侵犯第四腦室底。從第四腦室，腫瘤阻塞導水管 及第四腦室出口，引起腦積水。髓母細胞有沿蛛網膜下腔彌漫轉移的傾向。腫瘤鄰近的軟腦 膜常被浸潤，在腦表面形成一層乳白色膠樣組織。腫瘤可轉移到椎管內及大腦表面，或沿腦 室播散到第三腦室底。

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

髓母細胞瘤(medulloblastoma)由Bailey 與Cushing 于1925 年首先報道，是好發于兒童的 顱內惡性腫瘤，是中樞神經系統惡性程度最高的神經上皮性腫瘤之一有人認為其發生是由于 原始髓樣上皮未繼續分化的結果。這種起源于胚胎殘余細胞的腫瘤可發生在腦組織的任何部 位，但絕大多數生長在第四腦室頂之上的小腦蚓部。髓母細胞瘤的細胞形態很象胚胎期的髓 母細胞，因此采用了這個名稱。在人胚胎中僅見于后髓帆，這與好發于小腦蚓部相符合。亦 認為它是起源于原始細胞胚胎細胞殘余。髓母細胞瘤占膠質瘤的8.2%，多見于兒童，男女 之比為2:1。

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。