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正常肝組織；小鼠

5×105cells/T25培養瓶

貼壁

梭形、多角形

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

肝臟星形細胞是小葉內結締組織細胞，呈現肌成纖維細胞樣或脂肪細胞形態。他們參與肝臟細胞外基質的穩態，修復，再生，纖維化以有控制視黃醇的代謝，存儲和釋放。肝臟受傷后，肝臟星形細胞轉化成肌成纖維細胞樣，并且是纖維化的肝臟中 I 型膠原的主要來源。另外已發現在疾病狀態和肝內門靜脈高壓的發病過程中，肝星狀細胞通過細胞收縮調節肝臟微循環。該細胞也能掌控電壓激活型鈣離子流動，表達低親和力的生長因子受體p75，并可在神經生長因子的刺激下導致凋亡。因此，星形細胞激活的分子調控在將來有助于治療纖維化肝，并且能減少慢性肝病患者的發病率和死亡率。

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。